食用油中苯并（a）芘（BaP）ELISA檢測試劑盒使用說明書
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檢測限：1.5μg/kg?定量區(qū)間：2-20μg/kg
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本產(chǎn)品可以采用單點定標(biāo)，即點1個標(biāo)準(zhǔn)品實現(xiàn)定量分析，最大可實現(xiàn)47個樣本的檢測。采用單點定標(biāo)時，數(shù)據(jù)分析請來電索取專門的Excel數(shù)據(jù)分析軟件
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1.?樣本前處理（動植物性食用油脂，如菜籽油、大豆油、花生油、玉米油、調(diào)和油等）
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需要但未提供的試劑和器皿如下： |
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(1)?二氯甲烷，分析純 |
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(2)?正己烷，分析純 |
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(3)?甲醇，分析純 |
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(4)?去離子水 ????????? |
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(5)?5mL圓底或錐底玻璃離心管 |
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(6)?2ml玻璃進(jìn)樣瓶或者5ml圓底玻璃試管（一次性） |
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(7)?5mL有機(jī)玻璃離心管架（24孔），1個 |
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(8)?17*17*10cm瓷盤，1個 |
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試劑配制 |
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預(yù)處理試劑：取1管試劑A，加入到1瓶試劑B中，劇烈震蕩使其完全溶解，備用【配制好的預(yù)處理試劑呈白色半透明狀，于2-8℃保存有效期10天】 |
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1.1預(yù)處理 |
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1）稱取0.4±0.005g油樣于5mL玻璃離心管中，加入0.4mL?預(yù)處理試劑混勻； |
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2）室溫靜置5min（離心管斜躺在桌面上） |
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3）加入0.4mL去離子水、1mL正己烷劇烈振蕩2min；靜置分層約1min（此時可以先活化柱子） |
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1.2過SPE柱 |
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1）活化：依次采用1mL二氯甲烷、1mL正己烷過柱 |
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3）淋洗：依次用1mL正己烷、1mL試劑C淋洗，最后吹空氣3s； |
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4）解吸：加入1mL二氯甲烷解吸（流速1mL/min），收集全部解吸液于2mL玻璃進(jìn)樣瓶中 |
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5）濃縮及復(fù)溶：40℃水浴氮吹干；加入1mL甲醇渦旋15s；取0.1mL甲醇復(fù)溶液，再加入 |
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0.1mL樣本稀釋液渦旋15s |
2.?操作步驟
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實驗前，請將檢測試劑盒從2-8℃冰箱中取出，于室內(nèi)溫度20-28℃下平衡1小時！ |
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1）取出平衡后的適量板條，其余放回鋁膜袋中； |
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2）依次：加50μL標(biāo)準(zhǔn)品/樣本于相應(yīng)微孔中；加50μL酶結(jié)合物和50μL抗體至所有微孔； |
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3）蓋上板貼，于20-28℃下，孵育20分鐘；倒出微孔中液體； |
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4）將洗滌液注滿微孔浸泡15s倒出，重復(fù)2次； |
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5）加100μL底物至微孔中，于20-28℃下，孵育10分鐘； |
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6）加100μL終止液至微孔中，于450/630nm波長下，讀數(shù) |
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3.?結(jié)果分析
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1）結(jié)合率計算公式 |
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其中， ?????????????????????????????B：為i樣本或濃度點的結(jié)合率； |
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?????????????????????????????Ai：為i樣本或濃度點的吸光度； |
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?????????????????????????????A0：為零標(biāo)準(zhǔn)孔的吸光度； |
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2）建立標(biāo)準(zhǔn)曲線：以標(biāo)準(zhǔn)品濃度的對數(shù)為x軸，以其對應(yīng)的結(jié)合率B的logit值為y軸，進(jìn)行線性擬合 |
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建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。將樣本結(jié)合率（計算見1）中公式）代入曲線方程，即可求出樣本中苯并（α）芘的含量。 |
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3）超出檢測上限的樣本稀釋方法 |
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①?將樣本前處理步驟“1.2過SPE柱-5）”中0.1mL甲醇復(fù)溶液用無水甲醇稀釋5倍； |
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②?將①的溶液，參照說明書采用樣稀稀釋后點樣； |
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③?將得出的含量再乘以5，即為最終樣本中苯并（α）芘的含量； |
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4.?注意事項、常見問題分析及解決辦法
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1）注意事項 |
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n?不同產(chǎn)品、不同批次之間試劑不得混用； |
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n?吸取不同試劑，要更換吸頭，以免造成試劑污染； |
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n?底物變?yōu)樗{(lán)色，表示已污染變質(zhì)或過期，不得使用； |
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n?終止液中含鹽酸，使用時防止接觸皮膚，如不小心濺到，及時用大量流水沖洗，嚴(yán) |
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重時請及時就醫(yī)； |
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n?苯并（α）芘為致癌物，使用標(biāo)準(zhǔn)品、陽性樣本，須在通風(fēng)櫥內(nèi)進(jìn)行操作，并 |
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穿長袖實驗服，戴手套和口罩； |
