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蛋白中的色氨酸和酪氨酸可以被280 nm的紫外光激發(fā)并釋放出熒光，其熒光性質(zhì)與所處的微環(huán)境密切相關(guān)。蛋白變性過程中，色氨酸從疏水的蛋白內(nèi)部逐漸暴露到溶劑中，熒光釋放的峰值也從330 nm逐漸轉(zhuǎn)移到350 nm。
內(nèi)源差示掃描熒光技術(shù)（intrinsic fluorescence DSF），通過檢測溫度變化/變性劑濃度變化過程中蛋白內(nèi)源紫外熒光（350 nm/330 nm比值）的改變，獲得蛋白的熱穩(wěn)定性(Tm值)、化學(xué)穩(wěn)定性（Cm值）等參數(shù)。相比傳統(tǒng)的方法，無需添加染料，通量高，樣品用量少，數(shù)據(jù)精度高。
蛋白質(zhì)穩(wěn)定性分析儀PSA-16是一款無需加入熒光染料、高通量、低樣品消耗量檢測蛋白質(zhì)穩(wěn)定性的設(shè)備。該設(shè)備基于內(nèi)源差示掃描熒光技術(shù)（intrinsic fluorescence DSF），通過檢測溫度變化/變形劑濃度變化過程中蛋白內(nèi)源紫外熒光的改變，獲得蛋白質(zhì)的熱穩(wěn)定性(Tm值)、化學(xué)穩(wěn)定性（Cm值）等參數(shù)?？蓱?yīng)用于蛋白緩沖液條件篩選及優(yōu)化、小分子與蛋白結(jié)合情況的定性測定、蛋白質(zhì)修飾及改造后的穩(wěn)定性測定、蛋白變/復(fù)性研究、不同批次間蛋白穩(wěn)定性對比等多個方面。
基于內(nèi)源差示掃描熒光技術(shù)（intrinsic fluorescence DSF），在無需添加外源染料的條件下，對蛋白進行升溫變性，通過內(nèi)源熒光和散射光的變化與三級結(jié)構(gòu)變化的關(guān)系，PSA-16可用于測定不同buffer中蛋白的Tm值變化，獲得蛋白質(zhì)正確折疊的ZUI YOUbuffer條件；測定不同detergent條件下膜蛋白Tm值，進行detergent篩選；測定不同添加劑對蛋白穩(wěn)定性的影響；測定添加配體后Tm值變化進行配體結(jié)合篩選；測定蛋白中變性部分的比例，進行質(zhì)量控制；測定蛋白Tm值與濃度的相關(guān)性，獲得ZUI YOU的蛋白濃度進行后續(xù)結(jié)晶等實驗；測定蛋白去折疊過程，進行蛋白復(fù)性條件篩選；測定蛋白folding enthalpy，研究蛋白的長期穩(wěn)定性；測定不同批次和存儲后的蛋白的穩(wěn)定性，并進行相似性評分，對蛋白進行質(zhì)量控制。
多功能蛋白質(zhì)穩(wěn)定性分析儀PSA-16，無需對蛋白進行熒光標(biāo)記，可以直接測定蛋白在不同緩沖液條件中的Tm值，進行緩沖液篩選和優(yōu)化；同時還可以測定添加不同配體化合物對蛋白穩(wěn)定性的影響，通過Tm值變化進行配體結(jié)合篩選。PSA-16滿足我們目前對于蛋白質(zhì)穩(wěn)定性分析的迫切需求。
★280nm激發(fā)光下，蛋白以色氨酸(Trp)釋放的紫外熒光為主
★Trp熒光光譜與其所處微環(huán)境密切相關(guān)
★折疊狀態(tài)Trp在蛋白內(nèi)部疏水核心；蛋白去折疊后，Trp暴露到溶劑中
★去折疊過程，Trp Emission峰值從330nm轉(zhuǎn)變到350nm，蛋白紫外熒光發(fā)生紅移現(xiàn)象
★350nm與330nm熒光值的比值變化，即可檢測到蛋白去折疊過程
★測定參數(shù)：Tm、Ton、Cm、ΔG等
★條件無限制，可測定去垢劑環(huán)境中的膜蛋白
蛋白穩(wěn)定性分析
http://www.best-sciences.cn/SonList-2439554.html