注意：正式測定之前選擇預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。微量法
產(chǎn)品內(nèi)容：
試劑一：甲苯2mL×1 瓶，4℃保存；（自備）
試劑二：粉劑×1 瓶，臨用前加入9mL 蒸餾水，充分溶解待用，4℃保存；用不完的試劑4℃保存；
試劑三：液體19mL×1 瓶，4℃保存；
試劑四A 液：液體0.4mL×1 支，4℃保存；
試劑四B 液：液體1.6mL×1 瓶，4℃保存；臨用前將A 液倒入B 液中混合，待用；用不完的試劑4℃保存一周；
試劑五：液體 2mL×1 瓶，4℃保存；
標準品：液體 1mL×1 支，1mg/mL 氮標準液。
S-UE能夠水解尿素，產(chǎn)生氨和碳酸。土壤脲酶活性與土壤的微生物數(shù)量、有機物質(zhì)含量、
全氮和速效氮含量呈正相關(guān)。土壤脲酶活性反應(yīng)了土壤的氮素狀況。利用靛酚藍比色法測定脲酶水解尿素產(chǎn)生的NH3-N。
可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研缽、冰、甲苯
（不允許快遞）和蒸餾水。
a. 培養(yǎng)
測定管 | 對照管 | |
風(fēng)干土樣(g) | 0.05 | 0.05 |
試劑一（μL） | 20 | 20 |
振蕩混勻，使土樣全部濕潤，室溫放置 15min | ||
試劑二（μL） | 90 | |
蒸餾水（μL） | 90 | |
試劑三（μL） | 190 | 190 |
混勻，放入 37℃水浴培養(yǎng) 24h 后，10000g 常溫離心 10min，取上清液。 | ||
b. 將培養(yǎng)結(jié)束的上清液稀釋10 倍（取0.1mL 上清液，加入0.9mL 蒸餾水）。若最終計算得到的
ΔA仍大于0.5繼續(xù)稀釋。
c. 標準品的準備：吸取適量的標準溶液，稀釋至10、8、6、4、2、1、0.5、0μg/mL。
d. 測氨量（在微量玻璃比色皿或96 孔板中加入下列試劑）
測定管 | 對照管 | 標準管 | |
稀釋后的上清液（μL）/標準品 | 80 | 80 | 80 |
試劑四（μL） | 15 | 15 | 15 |
試劑五（μL） | 15 | 15 | 15 |
充分混勻，室溫放置 20min | |||
蒸餾水（μL） | 90 | 90 | 90 |
混勻，于 630nm 處，蒸餾水調(diào)零，讀吸光值 A，計算ΔA=A 測定管-A 對照管。每個測定管設(shè)一個對照管。標準曲線的建立：根據(jù)標準管的濃度（y）和吸光度（x,減去濃度為 0 的空白管），做標準曲線。
根據(jù)標準曲線，將ΔA帶入公式（x）計算測定中樣品的濃度（μg/mL）y值。單位的定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1μgNH3-N定義為一個酶活力單位。
脲酶活力（U/g 土樣）＝y×10×V反總÷W÷T=60×y
10：稀釋倍數(shù)；T：反應(yīng)時間，1d；V反總：反應(yīng)體系總體積，0.3mL；W：樣本質(zhì)量，0.05g。
