土壤總磷/有機(jī)磷/無機(jī)磷含量檢測試劑盒說明書 微量法
注意：正式測定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定。貨號：4071
規(guī)格：100T/96S
試劑一：液體 100mL×1 瓶，4℃保存。臨用前用蒸餾水稀釋 10 倍后再用。
試劑二：液體 5.5mL×1 瓶，4℃保存。
試劑三：粉劑×1 瓶，4℃避光保存。臨用前配制，加入 8mL 蒸餾水，充分溶解后加入 4mL 試劑二，混勻。
標(biāo)準(zhǔn)品：液體 1mL×1 支，40 μg/mL 無機(jī)磷標(biāo)準(zhǔn)品，4℃保存。
土壤總磷包括有機(jī)磷和無機(jī)磷，其中無機(jī)磷能夠直接被植物利用。土壤有機(jī)磷經(jīng)過礦化分解而轉(zhuǎn)化為無機(jī)磷。同時(shí)測定土壤總磷、有機(jī)磷和無機(jī)磷，可以全面反映土壤磷營養(yǎng)狀況。
利用鉬藍(lán)法定磷。取一份土樣，通過浸提法測定土壤無機(jī)磷含量；另外取一份土樣，經(jīng)高溫灼燒后，土壤有機(jī)磷轉(zhuǎn)化為無機(jī)磷，測得土壤總磷含量；總磷含量減去無機(jī)磷含量，即可計(jì)算出有機(jī)磷含量。
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96 孔板、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式水浴鍋，分析天平、可調(diào)式移液器、550℃高溫電爐、蒸餾水、100 目篩子（可更小）。
一、土壤不同形態(tài)磷提取：
1. 無機(jī)磷：稱取通過 100 目篩子的風(fēng)干土樣 0.01g，轉(zhuǎn)移到 1mL 離心管，加入 1mL 試劑一，震蕩混勻，然后置于 45℃水浴 1h，8000rpm，離心 10min，取上清液一，用于無機(jī)磷含量測定。
2. 總磷提?。?/span>取通過 100 目篩子的風(fēng)干土樣，550℃灼燒 1h，冷卻后稱取約 0.01g，轉(zhuǎn)移到 1 mL 離心管，加入 1mL 試劑一，震蕩混勻，然后置于 45℃水浴 1h，8000rpm，離心 10min，取上清液二， 用于總磷含量測定。
1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30 min 以上，調(diào)節(jié)波長到 660 nm，蒸餾水調(diào)零。2.打開水浴鍋，調(diào)節(jié)溫度到 40℃。
1. 空白管：取 EP 管，依次加入 100μL 蒸餾水，100μL 試劑三，混勻后置于 40℃水浴保溫 10min， 室溫冷卻 10 min 后于 660 nm 測定吸光度，記為 A 空白管。
2. 標(biāo)準(zhǔn)管：取 EP 管，依次加入 10μL 標(biāo)準(zhǔn)液，90μL 蒸餾水，100μL 試劑三，混勻后置于 40℃水浴保溫 10min，室溫冷卻 10 min 后于 660 nm 測定吸光度，記為 A 標(biāo)準(zhǔn)管。
3. 測定管：取 EP 管，依次加入 10μL 上清液一或者上清液二，90μL 蒸餾水，100μL 試劑三，混勻后置于 40℃水浴保溫 10min，室溫冷卻 10 min 后于 660 nm 測定吸光度，記為 A 測定管。
1.土壤無機(jī)磷含量（μg /g）=[C 標(biāo)準(zhǔn)液×(A 測定－A 空白)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)－A 空白)]×V 總÷W
=40×(A 測定－A 空白)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)－A 空白)÷W
C 標(biāo)準(zhǔn)液：40 μg/mL； W：土壤樣品質(zhì)量，g； V 總：上清液一總體積，1 mL。2.土壤總磷含量（μg/g）=[C 標(biāo)準(zhǔn)液×(A 測定－A 空白)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)－A 空白)]×V 總÷W
=40×(A 測定－A 空白)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)－A 空白)÷W
C 標(biāo)準(zhǔn)液：40 μg/mL；W：土壤樣品質(zhì)量，g；V 總：上清液二總體積，1mL。
3. 土壤有機(jī)磷（μg /g）=土壤總磷-土壤無機(jī)磷
試劑三配制過程中，可能會(huì)產(chǎn)生黑色固體，其不影響結(jié)果，注意吸取時(shí)不要將黑色固體吸入。
