組織鐵含量檢測試劑盒說明書 微量法
規(guī) 格：100T/96S
產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
提取液 | 液體 110 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
試劑一 | 粉劑×2 瓶 | 4℃保存 |
試劑二 | 粉劑×2 瓶 | 4℃保存 |
標(biāo)準(zhǔn)液 | 液體 3 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
溶液的配制：
1、 試劑一：臨用前配制，加入 5 mL 蒸餾水充分溶解，試劑一變黑后則不能使用；
2、 試劑二：臨用前配制，加入 235 μL 冰醋酸，加入 7.5 mL 蒸餾水充分溶解；溶解后 4℃保存一周；
3、 標(biāo)準(zhǔn)液：1 μmol/mL Fe3+標(biāo)準(zhǔn)液。臨用前稀釋 8 倍即 0.125 μmol/mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，現(xiàn)用現(xiàn)配。
鐵是人體必須的微量元素之一，它是血紅蛋白、肌紅蛋白、細(xì)胞色素及其他酶系統(tǒng)的主要成分，幫助氧的運(yùn)輸，促進(jìn)脂肪氧化。缺乏鐵元素容易造成貧血、代
謝紛亂，并影響機(jī)體的免疫功能。
亞硫酸鈉還原Fe3+生成Fe2+，Fe2+進(jìn)一步與2, 2’-聯(lián)吡啶顯色，在520nm處有吸收峰，測定該波長吸光度即可計算鐵含量。
最低檢出限：0.00206 μmol/mL
線性范圍：0.0039-0.25 μmol/mL
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標(biāo)儀、低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器、氯仿、冰和蒸餾水。
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）
稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液進(jìn)行冰浴勻漿。4000g 4℃離心 10 分鐘，取上清。
1. 可見分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，波長調(diào)至520nm。蒸餾水調(diào)零。
加樣表：
加入試劑（μL） | 空白管 | 測定管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 |
蒸餾水 | 120 | - | - |
0.125μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液 | - | - | 120 |
樣本 | - | 120 | - |
試劑一 | 60 | 60 | 60 |
試劑二 | 120 | 120 | 120 |
混勻后蓋緊，置于沸水浴5min，自來水冷卻；加入60μL氯仿（自備），充分震蕩混勻；室溫10000rpm， 離心10min，小心吸取上層無機(jī)相200μL，加入微量玻璃比色皿或者96孔板中，于520nm立即測定吸光度， 分別記為A空白管、A測定管、A標(biāo)準(zhǔn)管，計算ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管，ΔA測定=A測定管-A空白管。 | |||
1．按組織質(zhì)量計算：
組織鐵含量（μg/g 質(zhì)量）=（C標(biāo)準(zhǔn)液×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)）×V提取×55.845÷W= 6.98×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W 2．按組織蛋白濃度計算
組織鐵含量（μg/mg prot）=（C標(biāo)準(zhǔn)液×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)）×V提取×55.845÷（Cpr×V提取）
= 6.98×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷Cpr
C標(biāo)準(zhǔn)液：0.125μmol/mL Fe3+標(biāo)準(zhǔn)液；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；V提?。禾崛∫后w積，1mL；55.845： Fe的相對分子質(zhì)量，55.845μg/μmol。
1、 當(dāng)ΔA大于0.6 時，建議將樣本用提取液稀釋后進(jìn)行測定。
2、 試劑一溶解變黑后則不能使用；試劑二有毒性，做好防護(hù)措施。
